样品富集： 1. 样品前处理：取 25 g 待检样品置于 225 mL 改良 EC肉汤中，前增菌 10-12 h，对增菌液中的菌体富集用于LAMP 快速检测。 2. 适用样品类型：增菌液或者可疑菌落样品。 3. 待测样品存放：粗提的待检 DNA 样品保存于-4~0℃，不应该超过 24 h；利用试剂盒提取的 DNA 样品可在-20℃长期保存，但应避免反复冻融。
恒温荧光法核酸快速检测试剂盒操作流程
大肠杆菌O157:H7核酸快速检测试剂盒使用指南：
1，样品前处理
A. 样品增菌液模板DNA的制备： a) 在检测食品中大肠杆菌 O157:H7 时，吸增菌液 1 mL到 1.5 mL 规格的无菌离心管中，6000 r/min 离心5 min，弃上清，用50 μL无菌超纯水悬浮洗涤沉淀1-2次，6000 r/min 离心 5 min，完-全去除上清； b) 加入 30 μL 裂解液，充分悬浮菌体，轻弹管壁消除气泡，99℃加热 10 min； c) 12000 r/min 离心 15 min，上清即为粗提的 DNA，可转移至 0.2 mL 无菌离心管中，在-20℃下可长期保存。
B. 可疑菌落模板 DNA 的制备：挑取可疑菌落，悬浮到含 30 μL 裂解液的无菌离心管中，后按照上述步骤 b)、c)操作。
2，阴、阳性对照和干粉试剂复溶
A. 阴、阳性对照复溶：首-次使用时，加入 80 μL 超纯水至阳性对照和阴性对照冻干粉中，待溶解后混匀，-20℃存储待用。 B. 干粉试剂复溶：取出冻干粉试剂，按照需求剪取 n 个检测试剂管（n=待检测样品数+1 管阳性对照+1 管阴性对照），每管加入 20 μL 复溶液，完-全溶解后待用。
3，扩增反应 A. 打开能够提供恒温条件的仪器，设置到 64℃待用； B. 向上述已加入复溶液的 n 个反应管中各加入显色指示剂 2.5 μL； C. 向上述已加入复溶液的 n 个反应管中分别加入待测样品核酸、阴性对照、阳性对照各 2.5 μL，盖紧盖子； D. 将所有的反应管置于恒温仪器中，反应 50 min。
