A. 样品增菌液模板DNA的制备： a) 吸增菌液1 mL到1.5 mL规格的无菌离心管中，6000 r/min离心5 min，弃上清，50 μL无菌超纯水悬浮洗涤沉淀1-2次，6000 r/min离心5 min，完-全去除上清； b) 加入30 μL裂解液，充分悬浮菌体，轻弹管壁消除气泡，99℃加热10 min； c) 12000 r/min离心15 min，上清即为粗提的DNA，可转移至0.2 mL无菌离心管中，在-20℃下可长期保存。
B. 可疑菌落模板 DNA 的制备：挑取可疑菌落，悬浮到含30 μL裂解液的无菌离心管中，后按照上述步骤b)、c)操作。
2，阴、阳性对照和干粉试剂复溶
A. 阴、阳性对照复溶：首-次使用时，加入80 μL超纯水至阳性对照和阴性对照冻干粉中，待溶解后混匀，-20℃存储待用。 B. 干粉试剂复溶：取出冻干粉试剂，按照需求剪取n个检测试剂管（n=待检测样品数+1管阳性对照+1管阴性对照），每管加入20 μL复溶液，完-全溶解后待用。
3，扩增反应 A. 打开能够提供恒温条件的仪器，设置到64℃待用； B. 向上述已加入复溶液的n个反应管中各加入显色指示剂2.5 μL； C. 向上述已加入复溶液的n个反应管中分别加入待测样品核酸、阴性对照、阳性对照各2.5 μL，盖紧盖子； D. 将所有的反应管置于恒温仪器中，恒温64℃反应50 min。
