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金黄色葡萄球菌检验解决方案

点击次数:506 发布时间:2019-05-05

  金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在,空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因此,食品受到污染的机会很多。美国疾病控制中心报告,由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位,仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题,在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒,占整个细菌性食物中毒的33%,加拿大则更多,占到45%,中国金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件也时有发生。

       一、生物学特性

       典型的金黄色葡萄球菌为球型,直径0.5-1μm左右,显微镜下排列成葡萄串状见图1,图2。

 

 

       大多数菌株产生类胡萝卜素,使细胞团呈现出深橙色到浅黄色,产生的色素取决于生长条件,故称为金黄色葡萄球菌。金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛,大多数无荚膜,革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高,在普通培养基上生长良好,需氧或兼性厌氧,适生长温度37℃,适生长pH 7.4,干燥环境下可存活数周。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起,直径1-2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性,可在10-15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖,产酸不产气。甲基红反应阳性,VP反应弱阳性。

       二、流行病学

       (1)季节分布,多见于春夏季;中毒食品种类多,如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外,剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%,所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。一般说,金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品。

       (2)食品加工人员、炊事员或销售人员带菌,造成食品污染;食品在加工前本身带菌,或在加工过程中受到了污染,产生了肠毒素,引起食物中毒;熟食制品包装不严,运输过程受到污染;奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时,对肉体其他部位的污染。

        三、检测方法

       1、样品制备: 称取25g样品至盛有225mL 7.5%氯化钠肉汤中,固体样品研磨或置均质器中做成1:10的样品混悬液。若供计数检验,可按十进制递增稀释法将样品匀液再进行适当稀释。

       2、 增菌与分离培养: 将上述样品匀液于36℃±1℃培养18h~24h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长。将上述培养物,分别划线接种到Baird-Parker平板和血平板,血平板 36℃±1℃培养18h~24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培养24h~48h。 金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上,菌落直径为2mm~3mm,颜色呈灰色到黑色,边缘为淡色,周围为一混浊带,在其外层有一透明圈见图[4]。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度,偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落;但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些,外观可能粗糙并干燥。在血平板上,形成菌落较大,圆形、光滑凸起、湿润、金黄色(有时为白色),菌落周围可见完全透明溶血圈见图[5]。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。

 

 

       3、 鉴定: (1) 染色镜检: 金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌,排列呈葡萄球状,无芽孢,无荚膜,直径约为0.5μm~1μm。见图6

 

 

        (2) 血浆凝固酶试验: 取0.5ml兔血浆,放入小试管,再加入BHI培养物0.2mL~0.3mL,振荡摇匀,置36℃±1℃培养,每隔半小时观察一次,连续观察6小时,出现凝固即将小管倾斜或倒置,内容物不流动,判为阳性,同时做阴阳对照见图7。

 

 



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